|
|
||
|
发根农杆菌介导的野葛毛状根遗传转化体系
植物学报
2025, 60 (3):
425-434.
DOI: 10.11983/CBB24092
为建立高效的野葛(Pueraria lobata)毛状根遗传转化体系, 以野葛组培苗为外植体, 探讨不同因素对野葛毛状根遗传转化效率的影响。结果表明, 基因型是建立野葛毛状根高效遗传转化体系的主要限制因子; 发根农杆菌K599为最适宜的菌株; 以培养5-13代组培苗继代培养8天、第1-2节位刚展开的幼嫩叶片为最佳外植体材料, 预培养3天, 菌液侵染15分钟, 毛状根诱导率最高, 可达22.4%。野葛毛状根继代增殖的最佳培养基类型为固体培养基, 其毛状根鲜重是液体培养基中毛状根鲜重的75倍; PCR检测和荧光显微观察结果显示, GFP及rolB基因在野葛毛状根基因组中稳定表达, 共转化率为80%。研究初步建立了发根农杆菌介导的野葛毛状根遗传转化体系, 旨在为野葛基因功能研究奠定基础。
 View image in article
图4
野葛转基因毛状根GFP荧光观察及PCR检测
(A) 毛状根GFP荧光观察(bar=1 cm); (B) PCR检测(M: DL2000 DNA marker; N: 超纯水; V: K599; P: 阳性对照; 1-20: 不同转基因毛状根株系)
正文中引用本图/表的段落
在激发光源(波长为480 nm)的蓝光下观察组培苗和转基因毛状根, 以组培苗的根作为阴性对照, 初步判断呈现绿色荧光的毛状根为转基因阳性毛状根, 不发光的为阴性毛状根(图4A)。
选取20个毛状根系进行PCR鉴定, 结果显示, 转基因毛状根材料中均未检测出virG基因; T1-T20农杆菌K599诱导的转基因野葛毛状根中有16个能检测到GFP和rolB基因条带(图4B), 表明K599诱导产生阳性毛状根效率为80%。
本文的其它图/表
|
首页
