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发根农杆菌介导的野葛毛状根遗传转化体系
植物学报
2025, 60 (3):
425-434.
DOI: 10.11983/CBB24092
为建立高效的野葛(Pueraria lobata)毛状根遗传转化体系, 以野葛组培苗为外植体, 探讨不同因素对野葛毛状根遗传转化效率的影响。结果表明, 基因型是建立野葛毛状根高效遗传转化体系的主要限制因子; 发根农杆菌K599为最适宜的菌株; 以培养5-13代组培苗继代培养8天、第1-2节位刚展开的幼嫩叶片为最佳外植体材料, 预培养3天, 菌液侵染15分钟, 毛状根诱导率最高, 可达22.4%。野葛毛状根继代增殖的最佳培养基类型为固体培养基, 其毛状根鲜重是液体培养基中毛状根鲜重的75倍; PCR检测和荧光显微观察结果显示, GFP及rolB基因在野葛毛状根基因组中稳定表达, 共转化率为80%。研究初步建立了发根农杆菌介导的野葛毛状根遗传转化体系, 旨在为野葛基因功能研究奠定基础。
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图1
Ti质粒GFP载体信息
正文中引用本图/表的段落
挑取发根农杆菌阳性单菌落, 接种到含相应抗生素的YEB液体培养基中, 28°C、200 r·min?1振荡培养, 待其OD值A600达到0.6-0.8时停止培养。取菌液, 4 000 ×g离心10分钟, 弃上清液。用YEB液体培养基重悬, 调整OD值至0.5左右, 待用。发根农杆菌K599含有Ti质粒, 其GFP共转化载体信息如图1所示。
本文的其它图/表
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