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发根农杆菌介导的野葛毛状根遗传转化体系

曾文丹, 严华兵, 吴正丹, 尚小红, 曹升, 陆柳英, 肖亮, 施平丽, 程冬, 龙紫媛, 李婕宇

植物学报 2025, 60 (3): 425-434. DOI: 10.11983/CBB24092

摘要（197）

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为建立高效的野葛(Pueraria lobata)毛状根遗传转化体系, 以野葛组培苗为外植体, 探讨不同因素对野葛毛状根遗传转化效率的影响。结果表明, 基因型是建立野葛毛状根高效遗传转化体系的主要限制因子; 发根农杆菌K599为最适宜的菌株; 以培养5-13代组培苗继代培养8天、第1-2节位刚展开的幼嫩叶片为最佳外植体材料, 预培养3天, 菌液侵染15分钟, 毛状根诱导率最高, 可达22.4%。野葛毛状根继代增殖的最佳培养基类型为固体培养基, 其毛状根鲜重是液体培养基中毛状根鲜重的75倍; PCR检测和荧光显微观察结果显示, GFP及rolB基因在野葛毛状根基因组中稳定表达, 共转化率为80%。研究初步建立了发根农杆菌介导的野葛毛状根遗传转化体系, 旨在为野葛基因功能研究奠定基础。

Agrobacterium rhizogenes	Rooting time (d)	Hairy root frequency (%)	Hairy root density
CK	-	0 c	0 c
K599	14	12.1±0.6 a	2.2±0.1 a
R1601	16	8.3±0.5 b	1.1±0.1 b
ATCC15834	-	0 c	0 c
Ar4	-	0 c	0 c

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表3 不同发根农杆菌对野葛毛状根诱导效率的影响

正文中引用本图/表的段落

不同发根农杆菌诱导野葛毛状根其诱导效率具有显著差异(表3)。ATCC15834和Ar4的毛状根诱导率均为0, K599的诱导效率最高, 相比R1601增幅达45.78%。且K599菌株诱导外植体产生毛状根的时间最短, 诱导密度最大, 因此选择K599作为野葛毛状根诱导的最适农杆菌菌种。

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