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发根农杆菌介导的野葛毛状根遗传转化体系

曾文丹, 严华兵, 吴正丹, 尚小红, 曹升, 陆柳英, 肖亮, 施平丽, 程冬, 龙紫媛, 李婕宇

植物学报 2025, 60 (3): 425-434. DOI: 10.11983/CBB24092

摘要（196）

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为建立高效的野葛(Pueraria lobata)毛状根遗传转化体系, 以野葛组培苗为外植体, 探讨不同因素对野葛毛状根遗传转化效率的影响。结果表明, 基因型是建立野葛毛状根高效遗传转化体系的主要限制因子; 发根农杆菌K599为最适宜的菌株; 以培养5-13代组培苗继代培养8天、第1-2节位刚展开的幼嫩叶片为最佳外植体材料, 预培养3天, 菌液侵染15分钟, 毛状根诱导率最高, 可达22.4%。野葛毛状根继代增殖的最佳培养基类型为固体培养基, 其毛状根鲜重是液体培养基中毛状根鲜重的75倍; PCR检测和荧光显微观察结果显示, GFP及rolB基因在野葛毛状根基因组中稳定表达, 共转化率为80%。研究初步建立了发根农杆菌介导的野葛毛状根遗传转化体系, 旨在为野葛基因功能研究奠定基础。

Precultivation time (d)	Rooting time (d)	Hairy root frequency (%)	Hairy root density
0	16	2.4±0.1 c	1.1±0.4 b
1	13	8.1±1.5 b	1.2±0.1 b
2	13	18.9±2.1 a	2.0±0.0 a
3	10	21.3±1.7 a	1.8±0.4 a
4	14	11.1±0.9 b	1.0±0.2 b

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表5 不同预培养时间对野葛毛状根诱导效率的影响

正文中引用本图/表的段落

不同预培养时间下野葛毛状根诱导效率具有显著差异(表5)。YG-19组培苗第1-2节位刚展开的幼嫩叶片经K599农杆菌感染10天左右均开始长根, 而未经预培养的叶片感染16天左右才陆续出根。其中以预培养3天的毛状根诱导率最高(为21.3%), 相比预培养0、1、2和4天的诱导率, 增幅分别为787.5%、162.9%、12.7%和91.89%; 其诱导密度除预处理2天(为2.0)外, 均高于其它处理, 但出根时间最短, 仅需10天。因此以预培养3天为最佳预培养天数。

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