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发根农杆菌介导的野葛毛状根遗传转化体系

曾文丹, 严华兵, 吴正丹, 尚小红, 曹升, 陆柳英, 肖亮, 施平丽, 程冬, 龙紫媛, 李婕宇

植物学报 2025, 60 (3): 425-434. DOI: 10.11983/CBB24092

摘要（197）

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为建立高效的野葛(Pueraria lobata)毛状根遗传转化体系, 以野葛组培苗为外植体, 探讨不同因素对野葛毛状根遗传转化效率的影响。结果表明, 基因型是建立野葛毛状根高效遗传转化体系的主要限制因子; 发根农杆菌K599为最适宜的菌株; 以培养5-13代组培苗继代培养8天、第1-2节位刚展开的幼嫩叶片为最佳外植体材料, 预培养3天, 菌液侵染15分钟, 毛状根诱导率最高, 可达22.4%。野葛毛状根继代增殖的最佳培养基类型为固体培养基, 其毛状根鲜重是液体培养基中毛状根鲜重的75倍; PCR检测和荧光显微观察结果显示, GFP及rolB基因在野葛毛状根基因组中稳定表达, 共转化率为80%。研究初步建立了发根农杆菌介导的野葛毛状根遗传转化体系, 旨在为野葛基因功能研究奠定基础。

Primer name	Primer sequence (5′−3′)
GFP	F: CAGTGCTTCAGCCGCTAC R: TTCTCGTTGGGGTCTTTG
rolB	F: AAGTGCTGAGGAACAATC R: CAAGTGAATGAACAAGGAAC
virG	F: CCTTGGGCGTCGTCATAC R: TCGTCCTCGGTCGTTTCC

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表1 引物名称及序列

正文中引用本图/表的段落

提取诱导生成的毛状根的基因组DNA, 根据GFP、rolB和virG基因序列设计检测引物(表1)。PCR检测体系: 5 μL 2× Taq Master Mix, 上、下游引物各0.5 μL, 1 μL模板DNA, 加ddH₂O补充总体积至10 μL。反应程序: 94°C预变性5分钟; 94°C变性30秒, 60°C退火30秒, 72°C延伸30秒, 35个循环; 72°C延伸10分钟。

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