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发根农杆菌介导的野葛毛状根遗传转化体系
植物学报
2025, 60 (3):
425-434.
DOI: 10.11983/CBB24092
为建立高效的野葛(Pueraria lobata)毛状根遗传转化体系, 以野葛组培苗为外植体, 探讨不同因素对野葛毛状根遗传转化效率的影响。结果表明, 基因型是建立野葛毛状根高效遗传转化体系的主要限制因子; 发根农杆菌K599为最适宜的菌株; 以培养5-13代组培苗继代培养8天、第1-2节位刚展开的幼嫩叶片为最佳外植体材料, 预培养3天, 菌液侵染15分钟, 毛状根诱导率最高, 可达22.4%。野葛毛状根继代增殖的最佳培养基类型为固体培养基, 其毛状根鲜重是液体培养基中毛状根鲜重的75倍; PCR检测和荧光显微观察结果显示, GFP及rolB基因在野葛毛状根基因组中稳定表达, 共转化率为80%。研究初步建立了发根农杆菌介导的野葛毛状根遗传转化体系, 旨在为野葛基因功能研究奠定基础。
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图3
野葛毛状根的继代增殖
(A) 不同培养方式下野葛毛状根的鲜重; (B) 接种于固体培养基20天的毛状根; (C) 接种于液体培养基20天的毛状根。Bars=1 cm
正文中引用本图/表的段落
将诱导的YG-19毛状根分别置于无植物生长调节剂MS固体培养基和液体培养基上进行继代增殖培养。在固体培养基上培养4天左右即可产生新的毛状根分支, 且生长旺盛, 20天左右即可长满整个培养皿。而毛状根在液体培养基中生长缓慢, 逐渐褐化死亡(图3B, C), 仅有少量毛状根长出新的毛状根, 但呈玻璃化, 水渍化程度较高。培养20天后, 固体培养基上生长的毛状根鲜重是液体培养基中毛状根鲜重的75倍(图3A)。
本文的其它图/表
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