大花银莲花愈伤组织诱导及再生体系的建立

doi:10.11983/CBB21200

植物学报 ›› 2022, Vol. 57 ›› Issue (2): 217-226.DOI: 10.11983/CBB21200

大花银莲花愈伤组织诱导及再生体系的建立

逯锦春¹, 曹丽娜¹, 佟冠杰², 王鑫颖¹, 张利英¹, 喻锌¹, 李荟芳¹, 李彦慧¹^,^*()

¹河北农业大学园林与旅游学院, 保定 071000
²河北农业大学经济管理学院, 保定 071000

收稿日期:2021-11-18 接受日期:2022-01-04 出版日期:2022-03-01 发布日期:2022-03-24
通讯作者: 李彦慧
作者简介:*E-mail: 1141690277@qq.com
基金资助:
十三五国家重点研发计划(2020YFD1000700);河北省科技支撑项目(21326802D);河北省林业与草原局科技项目(1809508)

Establishment of Callus Induction and Regeneration System of Anemone silvestris

Jinchun Lu¹, Lina Cao¹, Guanjie Tong², Xinying Wang¹, Liying Zhang¹, Xin Yu¹, Huifang Li¹, Yanhui Li¹^,^*()

¹College of Landscape Architecture and Tourism, Hebei Agricultural University, Baoding 071000, China
²College of Economics and Management, Hebei Agricultural University, Baoding 071000, China

Received:2021-11-18 Accepted:2022-01-04 Online:2022-03-01 Published:2022-03-24
Contact: Yanhui Li

摘要/Abstract

摘要： 为建立野生大花银莲花(Anemone silvestris)组培再生体系, 分别以无菌苗上、下胚轴、叶片和叶柄为外植体, 探讨不同浓度植物生长调节剂对不同外植体的愈伤组织诱导、不定芽分化、增殖与生根的影响。结果表明, 4种外植体均可诱导出不定芽, 其中上胚轴诱导效果最佳, 其在1/2MS+2.0 mg∙L^-16-BA+0.1 mg∙L^-1NAA培养基中诱导率最高, 为86.67%; 最适增殖培养基为1/2MS+1.0 mg∙L^-16-BA+0.05 mg∙L^-1NAA, 增殖系数为3.67; 最佳生根培养基为1/2MS+0.3 mg∙L^-1IBA, 生根率为100%; 在草炭:蛭石=2:1 (v/v)的栽培基质中, 组培苗的移栽成活率最高, 为98.33%。该研究有效解决了野生大花银莲花在园林及药用生产上的种质资源紧缺难题, 为工厂化育苗提供了技术支撑。

关键词: 大花银莲花, 愈伤组织, 植株再生, 组织培养

Abstract: In order to establish the tissue culture and regeneration system of wild Anemone silvestris, we investigated effects of different concentrations of plant growth regulators on callus induction, adventitious bud differentiation, proliferation and rooting of different explants including epicotyl, hypocotyl, leaf and petiole. The results showed that adventitious buds could be induced in all four explants, among them the epicotyl was the best. The best medium for hypocotyl induction was 1/2MS+2.0 mg∙L^-1 6-BA+0.1 mg∙L^-1 NAA with the highest induction rate of 86.67%; The optimal medium for proliferation was as follow 1/2MS+1.0 mg∙L^-1 6-BA+0.05 mg∙L^-1 NAA, and the proliferation coefficient was 3.67; The optimal rooting medium was 1/2MS+0.3 mg∙L^-1 IBA with the rooting rate of 100%; In the medium of peat:vermiculite = 2:1 (v/v), the survival rate of tissue culture seedling was at 98.33%. This study effectively solved the shortage of germplasm resources of A. silvestris in garden and medicinal production, and provided technical support for the realization of factory seedling cultivation.

Key words: Anemone silvestris, callus, plant regeneration, tissue culture

逯锦春, 曹丽娜, 佟冠杰, 王鑫颖, 张利英, 喻锌, 李荟芳, 李彦慧. 大花银莲花愈伤组织诱导及再生体系的建立. 植物学报, 2022, 57(2): 217-226.

Jinchun Lu, Lina Cao, Guanjie Tong, Xinying Wang, Liying Zhang, Xin Yu, Huifang Li, Yanhui Li. Establishment of Callus Induction and Regeneration System of Anemone silvestris. Chinese Bulletin of Botany, 2022, 57(2): 217-226.

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参考文献 32

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No.	6-BA (mg∙L^-1)	NAA (mg∙L^-1)	Callus induction rate (%)	Growth condition
1	0	0	0.00±0.00 f	-
2	0.5	0.1	56.67±7.26 c	++
3	0.5	0.2	60.00±8.66 bc	++
4	0.5	0.5	23.33±3.33 def	+
5	0.5	1.0	0.00±0.00 f	-
6	1.0	0.1	86.67±7.26 ab	+++++
7	1.0	0.2	55.00±5.77 c	+++
8	1.0	0.5	20.00±2.89 ef	++
9	1.0	1.0	0.00±0.00 f	-
10	2.0	0.1	96.67±1.67 a	++++
11	2.0	0.2	51.67±8.82 cd	+++
12	2.0	0.5	41.67±8.82 cde	+++
13	2.0	1.0	33.33±4.41 cde	++

No.	6-BA (mg∙L^-1)	NAA (mg∙L^-1)	Callus induction rate (%)	Growth condition
1	0	0	0.00±0.00 f	-
2	0.5	0.1	56.67±7.26 c	++
3	0.5	0.2	60.00±8.66 bc	++
4	0.5	0.5	23.33±3.33 def	+
5	0.5	1.0	0.00±0.00 f	-
6	1.0	0.1	86.67±7.26 ab	+++++
7	1.0	0.2	55.00±5.77 c	+++
8	1.0	0.5	20.00±2.89 ef	++
9	1.0	1.0	0.00±0.00 f	-
10	2.0	0.1	96.67±1.67 a	++++
11	2.0	0.2	51.67±8.82 cd	+++
12	2.0	0.5	41.67±8.82 cde	+++
13	2.0	1.0	33.33±4.41 cde	++

No.	6-BA (mg∙L^-1)	NAA (mg∙L^-1)	Callus induction rate (%)	Budding rate (%)	Growth condition
1	0	0	0.00±0.00 d	0.00±0.00 f	-
2	0.5	0.1	86.67±6.01 ab	43.57±5.17 bc	++
3	0.5	0.2	93.33±4.41 ab	28.49±4.05 cd	+
4	0.5	0.5	71.67±4.41 bc	0.00±0.00 f	-
5	0.5	1.0	55.00±5.77 c	0.00±0.00 f	-
6	1.0	0.1	76.67±10.14 abc	0.00±0.00 f	-
7	1.0	0.2	83.33±4.41 ab	26.21±5.38 de	+
8	1.0	0.5	96.67±1.67 a	10.26±2.81 ef	+++
9	1.0	1.0	88.33±6.01 ab	0.00±0.00 f	-
10	2.0	0.1	100.00±0.00 a	76.67±4.41 a	++++
11	2.0	0.2	100.00±0.00 a	53.33±6.01 b	+++
12	2.0	0.5	93.33±4.41 ab	30.42±3.45 cd	++
13	2.0	1.0	100.00±0.00 a	0.00±0.00 f	-

No.	6-BA (mg∙L^-1)	NAA (mg∙L^-1)	Callus induction rate (%)	Budding rate (%)	Growth condition
1	0	0	0.00±0.00 d	0.00±0.00 f	-
2	0.5	0.1	86.67±6.01 ab	43.57±5.17 bc	++
3	0.5	0.2	93.33±4.41 ab	28.49±4.05 cd	+
4	0.5	0.5	71.67±4.41 bc	0.00±0.00 f	-
5	0.5	1.0	55.00±5.77 c	0.00±0.00 f	-
6	1.0	0.1	76.67±10.14 abc	0.00±0.00 f	-
7	1.0	0.2	83.33±4.41 ab	26.21±5.38 de	+
8	1.0	0.5	96.67±1.67 a	10.26±2.81 ef	+++
9	1.0	1.0	88.33±6.01 ab	0.00±0.00 f	-
10	2.0	0.1	100.00±0.00 a	76.67±4.41 a	++++
11	2.0	0.2	100.00±0.00 a	53.33±6.01 b	+++
12	2.0	0.5	93.33±4.41 ab	30.42±3.45 cd	++
13	2.0	1.0	100.00±0.00 a	0.00±0.00 f	-

No.	6-BA (mg∙L^-1)	NAA (mg∙L^-1)	Callus induction rate (%)		Growth condition
No.	6-BA (mg∙L^-1)	NAA (mg∙L^-1)	Leaf	Petiole	Leaf	Petiole
1	0	0	0.00±0.00 d	0.00±0.00 e	-	-
2	0.5	0.1	90.00±5.77 ab	93.33±3.33 abc	+	+
3	1.0	0.1	96.67±3.33 a	96.67±3.33 ab	++	+
4	2.0	0.1	100.00±0.00 a	100.00±0.00 a	+++++	+++++
5	4.0	0.1	80.00±5.77 bc	83.33±3.33 bcd	+	++
6	0.5	0.3	76.67±3.33 bc	80.00±5.77 cd	+++	++
7	1.0	0.3	80.00±0.00 bc	76.67±3.33 d	++	++
8	2.0	0.3	73.33±3.33 c	73.33±3.33 d	+++	+
9	4.0	0.3	76.67±3.33 bc	80.00±0.00 cd	+++	++
10	0.5	0.5	80.00±0.00 bc	73.33±3.33 d	++	+++
11	1.0	0.5	80.00±0.00 bc	80.00±0.00 cd	+++	++++
12	2.0	0.5	96.67±3.33 a	93.33±3.33 abc	++	+++
13	4.0	0.5	100.00±0.00 a	100.00±0.00 a	++++	+++

大花银莲花愈伤组织诱导及再生体系的建立

Establishment of Callus Induction and Regeneration System of Anemone silvestris

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No.	6-BA (mg∙L^-1)	NAA (mg∙L^-1)	Proliferation coefficient
No.	6-BA (mg∙L^-1)	NAA (mg∙L^-1)	Epicotyl	Hypocotyl	Leaf	Petiole
1	0	0	2.78±0.11 b	1.56±0.29 e	0.00±0.00 e	0.00±0.00 f
2	1	0.05	3.89±0.29 a	3.00±0.19 b	3.66±0.33 a	2.33±0.38 b
3	1.5	0.05	3.33±0.19 ab	1.78±0.22 de	2.44±0.11 bc	2.22±0.11 bc
4	2	0.05	2.13±0.11 cd	1.89±0.11 cde	1.47±0.11 d	2.44±0.13 b
5	4	0.05	1.78±0.30 d	1.55±0.23 e	1.44±0.12 d	2.12±0.29 bcd
6	1	0.1	3.11±0.11 b	2.44±0.12 bcd	2.44±0.11 bc	2.23±0.29 bc
7	1.5	0.1	1.89±0.29 d	2.66±0.30 bc	2.67±0.19 b	1.76±0.22 bcde
8	2	0.1	3.78±0.22 a	3.77±0.29 a	3.56±0.29 a	2.11±0.11 bcd
9	4	0.1	2.67±0.19 bc	2.55±0.11 bc	2.78±0.29 b	3.22±0.11 a
10	1	0.2	1.55±0.22 d	2.43±0.30 bcd	1.78±0.11 cd	1.22±0.22 e
11	1.5	0.2	2.00±0.18 d	2.55±0.12 bc	2.22±0.23 bc	1.44±0.12 de
12	2	0.2	3.00±0.19 b	2.58±0.11 bc	2.89±0.29 b	1.56±0.28 cde
13	4	0.2	1.67±0.17 d	2.45±0.22 bcd	2.66±0.33 b	1.89±0.29 bcde
Average			2.58±0.22 A	2.40±0.17 B	2.31±0.27 B	1.89±0.21 C

No.	Medium	Rooting rate (%)	Average rooting number	Rooting growth condition
1	1/2MS	73.89±3.89 a	9.00±1.53 abc	+
2	1/2MS+0.3 mg∙L^-1 IBA	100.00±0.00 a	16.33±2.19 a	++++
3	1/2MS+0.6 mg∙L^-1 IBA	75.00±14.43 a	10.33±0.88 abc	++
4	1/2MS+1.2 mg∙L^-1 IBA	100.00±0.00 a	7.67±2.33 bc	+++
5	1/2MS+2.0 mg∙L^-1 IBA	100.00±0.00 a	13.33±1.76 ab	+++
6	1/2MS+0.3 mg∙L^-1IAA	66.67±33.33 a	13.00±1.16 abc	++
7	1/2MS+0.6 mg∙L^-1IAA	100.00±0.00 a	13.33±0.33 ab	+++
8	1/2MS+1.2 mg∙L^-1IAA	83.33±16.67 a	10.00±1.16 abc	++
9	1/2MS+2.0 mg∙L^-1IAA	83.33±16.67 a	5.67±0.88 c	+

No.	Substrate	Transplanting survival rate (%)	Growth condition
1	Peat: perlite: vermiculite=1:1:1 (v/v/v)	66.67±6.01 b	++
2	Peat: perlite=3:1 (v/v)	50.00±5.00 b	+
3	Peat: sand=2:1 (v/v)	88.33±4.41 a	+++
4	Peat: vermiculite=2:1 (v/v)	98.33±1.67 a	++++
5	Peat	100.00±0.00 a	+++

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