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铁观音原生质体高效瞬时转化方法的建立
植物学报
2022, 57 (3):
340-349.
DOI: 10.11983/CBB21206
近年来, 茶树基因组测序的完成为茶树在分子和基因水平的研究奠定了基础。但由于转基因技术尚不成熟且茶树生长周期较长, 茶树的基因功能研究依然不能有效开展。采用铁观音(Camellia sinensis var. sinensis cv. ‘Tieguanyin’)实生幼苗叶片, 通过筛选多种纤维素酶、果胶酶、离析酶和甘露醇的浓度组合, 并结合原生质体的数量、活性和杂质含量综合确定了最佳配方, 成功建立了铁观音茶苗叶片原生质体提取和PEG介导的高效瞬时转化体系, 转化率达56.25%。利用该系统探索了茶氨酸代谢通路中2个重要合成酶(茶氨酸合成酶(TSI)和谷氨酰胺合成酶(GSII-1.1))的亚细胞定位。研究发现, 这2种酶均定位于铁观音原生质体细胞质中。茶苗叶片原生质体提取和瞬时转化体系的建立为茶树基因组功能研究奠定了技术基础。  View image in article
图4
拟南芥和铁观音叶肉原生质体中GSII-1.1和TSI蛋白亚细胞定位
(A)-(D) 拟南芥原生质体中转化HBT-GFP-GSII-1.1; (E)-(H) 拟南芥原生质体中转化HBT-GFP-TSI; (I)-(L) 铁观音叶肉原生质体中转化HBT-GFP-GSII-1.1; (M)-(P) 铁观音叶肉原生质体中转化HBT-GFP-TSI。Bars=10 μm
正文中引用本图/表的段落
利用茶树原生质体瞬时转化技术, 通过超高分辨率超高灵敏度激光共聚焦显微镜(Zeiss LSM880)观察拟南芥及铁观音幼叶原生质体中茶氨酸合成酶TSI和谷氨酰胺合成酶GSII-1.1的亚细胞定位情况(图4A-P)。结果表明, 拟南芥及铁观音幼叶原生质体中转化的2种酶均定位在细胞质中, 与预测的茶氨酸合成酶的生化功能相吻合。
本文的其它图/表
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