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根癌农杆菌介导万寿菊遗传转化体系的建立
植物学报
2023, 58 (5):
760-769.
DOI: 10.11983/CBB22141
以万寿菊(Tagetes erecta)里程碑·黄色的小叶为外植体, 采用农杆菌介导法探究抗生素浓度、菌株类型、菌液浓度、侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度和抗褐化剂种类对万寿菊遗传转化效率的影响。结果表明, 头孢霉素(Cef)和硫酸卡那霉素(Kan)的适宜浓度分别为100 mg·L-1和10 mg·L-1; EHA105菌株的稳定转化效率最高; 菌液浓度OD600=0.1、侵染5分钟及共培养1天为最佳侵染条件。此外, 在侵染过程中添加100 µmol·L-1乙酰丁香酮(AS)和筛选培养基中添加0.2 g·L-1聚乙烯吡咯烷酮(PVP)均能提高出芽率。经GUS染色、PCR检测以及Southern blot检测证明转化成功, 转化效率达到4%左右。研究结果为万寿菊基因功能研究和转基因育种奠定了基础。
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图1
菌株类型对万寿菊遗传转化效率的影响
(A) 3种菌株的GUS基因瞬时表达和抗性愈伤组织示意图(bars=1 cm); (B) 菌株类型对GUS基因瞬时表达效率及抗性愈伤组织诱导效率的影响(相同颜色柱形图上不同小写字母表示在0.05水平差异显著)
正文中引用本图/表的段落
不同菌株类型对万寿菊小叶瞬时转化效率和抗性愈伤组织诱导率具有显著影响(图1A, B)。菌株EHA105和LBA4404的侵染能力最强, GUS瞬时表达率分别为64.44%和77.78%, 抗性愈伤组织诱导率分别为53.85%和33.33%, 显著优于菌株GV3101 (其菌株的GUS瞬时表达率和抗性愈伤组织诱导率仅为26.67%和10.26%) (图1B)。菌株LBA4404的瞬时侵染能力稍强于EHA105, 但其稳定性的维持却弱于菌株EHA105 (图1A)。且菌株LBA4404在培养过程中易结球, 影响操作, 故EHA105为万寿菊小叶遗传转化适宜的农杆菌菌株。
(A) 3种菌株的GUS基因瞬时表达和抗性愈伤组织示意图(bars=1 cm); (B) 菌株类型对GUS基因瞬时表达效率及抗性愈伤组织诱导效率的影响(相同颜色柱形图上不同小写字母表示在0.05水平差异显著)
本文的其它图/表
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