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谷子茎尖体外遗传转化体系的建立与优化

杨澜, 刘雅, 项阳, 孙秀娟, 颜景畏, 张阿英

植物学报 2021, 56 (1): 71-79. DOI: 10.11983/CBB20119

摘要（1471）

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以谷子(Seteria italica)豫谷一号为实验材料, 建立了一套简便、稳定的体外茎尖遗传转化体系。通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的茎尖转化法, 对转化受体采取不同的处理方式, 待拟转化株长到三叶期后进行PCR鉴定。探明了草丁膦(Basta)喷施处理用于谷子转基因幼苗筛选的最适浓度, 以及2种不同检测方式(直接PCR和喷施Basta+PCR)鉴定转基因植株的效果。在上述基础上, 对影响谷子遗传转化体系的多种因素进行优化。结果表明, 菌液浓度(OD₆₀₀)=1.4、侵染液中乙酰丁香酮浓度为800 μmol∙L ^-1、侵染压强为0.05 MPa、侵染40分钟有利于谷子茎尖的遗传转化。同时, 采用上述优化系统获得谷子转SiCBL4基因植株, 通过喷施草丁膦和实时荧光定量PCR对T₂代转基因植株进行遗传稳定性分析, 可节约检测时间。综上, 该研究初步建立了稳定的谷子体外茎尖遗传转化体系, 并开发了一种便捷的检测后代转基因植株的组合方法。

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图1 pCUN-NHF质粒T-DNA区段示意图
LB: LB T-DNA重复; Ubi promoter: 玉米Ubiquitin1启动子; HA: HA标签; MCS: 多克隆位点; 35S promoter: CaMV35S启动子; Bar: 抗草铵膦基因; RB: RB T-DNA重复

正文中引用本图/表的段落

供试材料谷子(Seteria italica (L.) Beauv.)品种豫谷一号由本实验室保存。遗传转化所用的大肠杆菌(Escherichia coli)菌株为DH5α、根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)选用LBA4404, 质粒为pCUN- NHF, 分别携带Bar基因, 均由本实验室保存。pCUN- NHF质粒T-DNA区如图1所示。

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