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谷子茎尖体外遗传转化体系的建立与优化
植物学报
2021, 56 (1):
71-79.
DOI: 10.11983/CBB20119
以谷子(Seteria italica)豫谷一号为实验材料, 建立了一套简便、稳定的体外茎尖遗传转化体系。通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的茎尖转化法, 对转化受体采取不同的处理方式, 待拟转化株长到三叶期后进行PCR鉴定。探明了草丁膦(Basta)喷施处理用于谷子转基因幼苗筛选的最适浓度, 以及2种不同检测方式(直接PCR和喷施Basta+PCR)鉴定转基因植株的效果。在上述基础上, 对影响谷子遗传转化体系的多种因素进行优化。结果表明, 菌液浓度(OD600)=1.4、侵染液中乙酰丁香酮浓度为800 μmol∙L -1、侵染压强为0.05 MPa、侵染40分钟有利于谷子茎尖的遗传转化。同时, 采用上述优化系统获得谷子转SiCBL4基因植株, 通过喷施草丁膦和实时荧光定量PCR对T2代转基因植株进行遗传稳定性分析, 可节约检测时间。综上, 该研究初步建立了稳定的谷子体外茎尖遗传转化体系, 并开发了一种便捷的检测后代转基因植株的组合方法。  View image in article
图5
两种不同方式检测转基因植株的转化率
数据为平均值±标准差(n=3)。Student’s t-test, * P<0.05
正文中引用本图/表的段落
(A) 不同浓度的草丁膦处理谷子的表型图(bar=5.0 cm); (B) 不同浓度草丁膦处理下谷子的存活率。数据为平均值±标准差(n=3)。Student’s t-test, ** P<0.01, *** P<0.001
为了优化检测手段, 我们将三叶期的待检测幼苗平均分成两部分, 并采取2种方式进行检测: 取一半幼苗不做处理直接进行PCR检测, 另外一半均匀喷施浓度为25 mg?L-1草丁膦后, 将存活植株进行PCR检测, 统计2种检测方法的转化率(图5), 结果表明, 直接进行PCR检测的转基因植株幼苗的转化率约为2.5%; 采取喷施Basta+PCR组合的方法转化率约为1.5%, 且3次重复结果无显著差异。尽管两种检测方法存在一定差异, 但采取组合方法进行检测, 不仅经济实惠, 而且可以节约时间。因此, 本研究后续实验检测转基因植株均采用喷施Basta+PCR组合的方法。
本文的其它图/表
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