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星蕨体外快繁技术
葛晓青, 李梦瑶, 黄衡宇, 张爱丽
植物学报    2025, 60 (6): 944-956.   DOI: 10.11983/CBB24190
摘要   (539 HTML79 PDF(pc) (6057KB)(2110)  

为加强野生蕨类植物的保护与开发, 优化星蕨(Microsorum punctatum)孢子萌发方法和条件, 比较分析了不同因素对原叶体增殖、孢子体诱导、绿色球状小体(GGBs)诱导及其发育为幼孢子体的影响, 建立人工高效快繁技术体系。以成熟孢子为材料, 分别以MS、1/2MS、1/3MS和1/4MS为基本培养基在无菌条件下萌发; 通过L9(34)正交试验, 研究无机盐浓度、植物生长调节剂及其质量浓度对原叶体发生和增殖的影响。当原叶体增殖到一定数量时, 再以MS、1/2MS、1/3MS和1/4MS为基本培养基筛选适宜诱导孢子体的培养基; 随后, 以幼孢子体为材料诱导GGBs发育为新的幼孢子体并炼苗移栽。适宜孢子萌发的培养基为1/2MS, 原叶体在MS+0.3 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1 NAA培养基中大量增殖, 60天后增殖系数约为9.6; 将原叶体切割后接入1/4MS培养基, 加无菌水培养90天后, 幼孢子体发生系数约为10.0; 幼孢子体在1/2MS+1.5 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 NAA培养基中可诱导出GGBs, 诱导率达93.3%, GGBs在此培养基中的增殖系数达32.0; 在1/2MS培养基中GGBs的分化成苗率较高, 最高约为92%; 试管苗经炼苗移栽成活率在90%以上。该研究建立了原叶体-受精-孢子体和幼孢子体-GGBs-幼孢子体2个技术体系, 尤其是GGBs的产生, 极大缩短了植株的再生周期。研究结果可为优质种苗及其它蕨类植物的人工繁育提供技术支撑。


Levels Factors
A (basic medium) B
(mg·L-1 6-BA)
C
(mg·L-1 NAA)
1 MS 0.3 0.5
2 1/2MS 0.6 1.0
3 1/4MS 1.2 1.5
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表1 原叶体增殖L9(34)正交试验
正文中引用本图/表的段落
以不同基本培养基类型、6-BA和NAA为因素进行L9(34)正交试验, 其组合见表1。培养60天后, 统计增殖系数并测定接种前后的重量。
当原叶体增殖到一定数量时, 选取鲜绿、蓬松且表面无假根的大原叶体团, 分割为1.0 cm × 1.0 cm的小原叶体团, 以不同类型的基本培养基(MS、1/2MS、1/3MS和1/4MS)培养诱导孢子体形成。所有实验组在转接10天后向培养瓶中添加高度约1.0 mm (2-3 mL)的无菌水帮助精子游动。以15天为1个周期向培养基中添加无菌水至初始高度, 确保培养基内有一段液柱, 促使受精作用持续发生。60天后, 统计幼孢子体发生系数。
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