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菊花品种万代风光再生及遗传转化体系的建立
植物学报
2025, 60 (4):
597-610.
DOI: 10.11983/CBB24151
菊花品种万代风光(Chrysanthemum × morifolium ‘Wandai Fengguang’)的色素背景适宜利用分子育种技术调控花瓣铁离子浓度进而培育蓝色花, 且其在夏秋两季均可开花, 是研究菊花开花期分子调控机理的重要材料, 但缺少高效的再生体系和遗传转化体系。以该品种为实验材料, 研究不同外植体类型和植物生长调节剂组合对其再生的影响, 并探讨农杆菌介导的遗传转化方法中相关因素对遗传转化效率的影响。结果表明, 适宜菊花万代风光再生的最适外植体为茎间薄层, 最适培养基为MS+1.5 mg∙L-1 6-BA+0.6 mg∙L-1 NAA, 分化率为70.06%, 不定芽生成系数为3.37; 实验确定茎间薄层分化和不定芽生根的卡那霉素选择压分别为7.5 mg∙L-1和5.0 mg∙L-1。预培养1天、OD600=0.8、处理5分钟及黑暗条件下共培养3天为最佳遗传转化体系。经过卡那霉素筛选共获得抗性苗15株, PCR鉴定发现2株阳性苗, 转化效率为13.33%。研究结果为利用这一独特品种资源解析菊花基因功能和进行定向改良的分子育种奠定了基础, 也为其它菊花品种的再生和转化体系建立提供参考。
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图1
植物表达载体pBI121的结构
RB: T-DNA区段右边界; NOS-pro: 农杆菌胭脂碱合成酶基因启动子; KanR: 卡那霉素抗性筛选标记基因; NOS-ter: 农杆菌胭脂碱合成酶基因终止子; CaMV35S-pro: 花椰菜花叶病毒35S启动子; CcVIT: 矢车菊液泡铁离子转运蛋白基因; LB: T-DNA区段左边界
正文中引用本图/表的段落
从-80°C冰箱中取出含有植物表达载体pBI121 (图1)的GV3101农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌液, 置于冰上解冻后, 在超净工作台上用无菌小枪头蘸取少量菌液, 在含50 mg?L-1 Kan和50 mg?L-1利福平(rifampicin, Rif)的LB培养基上划线, 然后置于28°C培养箱倒置培养2天, 直至出现单克隆菌斑。用无菌小枪头挑取单菌落, 接种到含Kan和Rif的液体LB培养基中, 置于28°C摇床中振荡培养直至菌液变浑浊。通过菌液PCR检测农杆菌中是否含有矢车菊液泡铁离子转运蛋白基因CcVIT, 将含有目的基因的农杆菌以1:100比例进行扩大培养, 2 800 ×g离心10分钟后收集菌体, 用MS培养液重悬。
本文的其它图/表
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