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菊花品种万代风光再生及遗传转化体系的建立

李晶晶, 李艳飞, 王安琪, 王佳颖, 邓成燕, 卢敏, 马剑英, 戴思兰

植物学报 2025, 60 (4): 597-610. DOI: 10.11983/CBB24151

摘要（259）

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菊花品种万代风光(Chrysanthemum × morifolium ‘Wandai Fengguang’)的色素背景适宜利用分子育种技术调控花瓣铁离子浓度进而培育蓝色花, 且其在夏秋两季均可开花, 是研究菊花开花期分子调控机理的重要材料, 但缺少高效的再生体系和遗传转化体系。以该品种为实验材料, 研究不同外植体类型和植物生长调节剂组合对其再生的影响, 并探讨农杆菌介导的遗传转化方法中相关因素对遗传转化效率的影响。结果表明, 适宜菊花万代风光再生的最适外植体为茎间薄层, 最适培养基为MS+1.5 mg∙L^-16-BA+0.6 mg∙L^-1NAA, 分化率为70.06%, 不定芽生成系数为3.37; 实验确定茎间薄层分化和不定芽生根的卡那霉素选择压分别为7.5 mg∙L^-1和5.0 mg∙L^-1。预培养1天、OD₆₀₀=0.8、处理5分钟及黑暗条件下共培养3天为最佳遗传转化体系。经过卡那霉素筛选共获得抗性苗15株, PCR鉴定发现2株阳性苗, 转化效率为13.33%。研究结果为利用这一独特品种资源解析菊花基因功能和进行定向改良的分子育种奠定了基础, 也为其它菊花品种的再生和转化体系建立提供参考。

Concentration of kanamycin (mg∙L^-1)	Callus formation rate (%)	Differentiation rate (%)
0	97.22±4.81 ab	69.44±12.73 a
2.5	100.00±0.00 a	16.67±8.34 b
5	80.44±4.72 bc	5.56±4.81 bc
7.5	63.89±12.73 cd	0.00±0.00 c
10	50.00±8.33 de	0.00±0.00 c
15	33.33±16.67 e	0.00±0.00 c

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表4 卡那霉素对菊花万代风光茎间薄层分化的影响

正文中引用本图/表的段落

Kan为转基因常用的标记抗生素, 对受体材料进行Kan测试有利于抗性植株的筛选。结果显示, 在不含Kan的对照培养基中, 茎间薄层形成绿色膨大的愈伤组织, 并能正常分化出不定芽。随着Kan浓度的增加, 愈伤组织诱导率和分化率逐渐降低, 茎间薄层逐渐呈白色, 生长异常。当Kan浓度为7.5 mg?L-1时, 不定芽再生完全被抑制。因此选择7.5 mg?L-1 Kan作为菊花万代风光茎间薄层的临界抗性选择压(表4; 图3)。

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