菊花品种万代风光再生及遗传转化体系的建立
李晶晶, 李艳飞, 王安琪, 王佳颖, 邓成燕, 卢敏, 马剑英, 戴思兰
植物学报
2025, 60 (
4):
597-610.
DOI: 10.11983/CBB24151
菊花品种万代风光(Chrysanthemum × morifolium ‘Wandai Fengguang’)的色素背景适宜利用分子育种技术调控花瓣铁离子浓度进而培育蓝色花, 且其在夏秋两季均可开花, 是研究菊花开花期分子调控机理的重要材料, 但缺少高效的再生体系和遗传转化体系。以该品种为实验材料, 研究不同外植体类型和植物生长调节剂组合对其再生的影响, 并探讨农杆菌介导的遗传转化方法中相关因素对遗传转化效率的影响。结果表明, 适宜菊花万代风光再生的最适外植体为茎间薄层, 最适培养基为MS+1.5 mg∙L-1 6-BA+0.6 mg∙L-1 NAA, 分化率为70.06%, 不定芽生成系数为3.37; 实验确定茎间薄层分化和不定芽生根的卡那霉素选择压分别为7.5 mg∙L-1和5.0 mg∙L-1。预培养1天、OD600=0.8、处理5分钟及黑暗条件下共培养3天为最佳遗传转化体系。经过卡那霉素筛选共获得抗性苗15株, PCR鉴定发现2株阳性苗, 转化效率为13.33%。研究结果为利用这一独特品种资源解析菊花基因功能和进行定向改良的分子育种奠定了基础, 也为其它菊花品种的再生和转化体系建立提供参考。
实验共侵染茎间薄层341个, 通过Kan抗性筛选, 最终获得15株抗性苗。对抗性苗进行DNA水平的鉴定, 有2株抗性苗经过PCR检测扩增出长度正确的目的条带, 与阳性对照一致, 其余13株均未扩增到目的条带, 且ddH2O和野生型DNA中均未扩增出目的条带(图6)。由此判定矢车菊液泡铁离子转运蛋白基因CcVIT已成功转入菊花万代风光基因组中, 共获得2株阳性苗, 阳性率为13.33%。
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