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樟叶越桔细胞悬浮培养条件的优化
李楚然, 付羚, 刘云, 杨晓琴, 朱国磊, 解思达, 马焕成, 赵平
植物学报    2022, 57 (2): 227-235.   DOI: 10.11983/CBB21069
摘要   (338 HTML25 PDF(pc) (2473KB)(268)  

为了提高樟叶越桔(Vaccinium dunalianum)悬浮培养细胞的生物量, 以樟叶越桔叶片愈伤组织为试材, 通过单因素试验探究不同蔗糖浓度、培养基pH值、培养基体积、初始接种量和摇床转速对悬浮培养细胞生长的影响, 并根据响应面法Box-Behnken试验设计原理进行组合试验以优化培养条件。结果显示, 以改良WPM培养基为基础培养基, 樟叶越桔细胞悬浮培养的最优条件为40 g·L-1蔗糖、培养基pH5.2、培养基体积45 mL、初始接种量2.64 g和摇床转速为149 r·min-1, 其细胞生物量干重为0.184 4 g, 与理论预测值0.184 5 g较为接近, 且细胞的生长曲线呈S型。研究结果为樟叶越桔悬浮培养细胞次生代谢产物的生产调控奠定了技术基础。


Code Factors Levels
-1 0 1
A Sucrose concentration (g·L-1) 30 40 50
B pH value 4.5 5 5.5
C Cultivation medium volume (mL) 40 45 50
D Initial inoculation size (g) 2.0 2.5 3.0
E Shaking speed (r·min-1) 120 150 180
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表1 响应面试验的因素与水平
正文中引用本图/表的段落
基于单因素试验结果, 通过Design-Expert V12.0.3.3软件并运用Box-Behnken (Box-Behnken design, BBD)试验设计原理, 以樟叶越桔悬浮培养细胞的生物量为响应值, 对蔗糖浓度、培养基pH值、培养基体积、初始接种量和摇床转速设计了5因素3水平的响应面试验(表1)。响应面所得参数通过试验进行验证, 以检验优化方案的可行性。
A-E表1
A-E are shown in Table 1. *P<0.05; **P<0.01
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