RNAi载体导入黄瓜的遗传转化体系

doi:10.3724/SP.J.1259.2014.00183

植物学报 ›› 2014, Vol. 49 ›› Issue (2): 183-189.DOI: 10.3724/SP.J.1259.2014.00183 cstr: 32102.14.SP.J.1259.2014.00183

RNAi载体导入黄瓜的遗传转化体系

王烨, 顾兴芳^*, 张圣平, 苗晗, 陈国华, 谢丙炎

中国农业科学院蔬菜花卉研究所, 北京 100081

收稿日期:2013-01-26 修回日期:2013-04-12 出版日期:2014-03-01 发布日期:2014-01-07
通讯作者: 顾兴芳
基金资助:
国家现代农业产业技术体系专项资金资助项目;农业部园艺作物生物学与种质创新重点实验室资助项目

Transformation of RNAi Vector in Cucumber (Cucumis sativus) In Vitro by Agrobacterium tumefaciens-mediated Transfection

Ye Wang, Xingfang Gu^*, Shengping Zhang, Han Miao, Guohua Chen, Bingyan Xie

Institute of Vegetables and Flowers, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China

Received:2013-01-26 Revised:2013-04-12 Online:2014-03-01 Published:2014-01-07
Contact: Xingfang Gu

摘要/Abstract

摘要： 以黄瓜(Cucumis sativus)子叶和子叶节为外植体, 利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法建立黄瓜遗传转化体系并进行优化, 将南方根结线虫(Meloidogyme incognita)寄生相关基因的RNA干扰载体导入黄瓜, 通过潮霉素(Hyg)浓度梯度筛选得到99株潮霉素抗性植株。经PCR和Southern-blot检测, 获得10株目的基因以单拷贝形式整合的转基因黄瓜, 子叶和子叶节的Southern-blot阳性率分别为13.9%和6.9%。该研究建立并优化了RNA干扰载体导入黄瓜的高效遗传转化体系, 成功获得了转基因黄瓜植株。

关键词: 黄瓜, RNAi载体, 子叶, 子叶节, 转基因

Abstract: The RNAi vector of the target gene was transfected into cucumber (Cucumis sativus) cotyledons and cotyledon nodes by Agrobacterium tumefaciens-mediated transfection. A total of 99 regeneration plants were hygromycin-resistant. PCR and Southern-blot analysis revealed that target gene was integrated into the genome of 10 regenerated plants. The transformation efficiency in the cucumber cotyledon and cotyledon node was significantly increased from 4.1% to 13.9% and 3.1% to 6.9%, respectively, when using different hygromycin concentrations in the selection cultivation. We have optimized the genetic transformation system with an RNA interference vector in cucumber and successfully obtained transgenic cucumber plants.

Key words: cucumber, RNAi vector, cotyledon, cotyledon node, transformation

王烨, 顾兴芳, 张圣平, 苗晗, 陈国华, 谢丙炎. RNAi载体导入黄瓜的遗传转化体系. 植物学报, 2014, 49(2): 183-189.

Ye Wang, Xingfang Gu, Shengping Zhang, Han Miao, Guohua Chen, Bingyan Xie. Transformation of RNAi Vector in Cucumber (Cucumis sativus) In Vitro by Agrobacterium tumefaciens-mediated Transfection. Chinese Bulletin of Botany, 2014, 49(2): 183-189.

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参考文献

韩欣 (2010). 根结线虫基因16D转化烟草和黄瓜的研究. 硕士学位论文. 长沙：湖南农业大学.
魏爱民，张文珠，杜胜利，韩毅科，张桂华，刘楠 (2008). 黄瓜花粉管通道法抗虫基因导入及卡那霉素抗性筛选. 华北农学报 23（6）, 54-57.
魏爱民，张文珠，杜胜利，韩毅科，张桂华，张历 (2006). 影响农杆菌介导的黄瓜抗虫基因遗传转化体系的因素研究. 天津农业科学 12（3）, 1-3.
于玉梅 (2008). 根结线虫16D10基因转化黄瓜的研究. 硕士学位论文. 长沙：湖南农业大学.
张若纬 (2010). 黄瓜离体再生和遗传转化体系的建立. 硕士学位论文. 北京：中国农业科学院研究生院.
张守杰 (2011). 黄瓜再生体系的建立及农杆菌介导的遗传转化. 硕士学位论文. 泰安：山东农业大学.
张文珠，巍爱民，杜胜利，韩毅科，张桂华，刘楠 (2009). 黄瓜农杆菌介导法与花粉管通道法转基因技术. 西北农业学报 18（1）, 217-220.
朱妍妍 (2008). RNAi技术在黄瓜抗根结线虫遗传转化中的应用研究. 硕士学位论文. 泰安：山东农业大学.
Babinet C, Morello D, Renard JP. (1989). Transgenic mice. Genome, 31, 938-949.
Martin DIK, Whitlaw E. (1996). Vagaries of variegating trans-genes. BioEssays, 18(11), 919-923.
Eissenberg JC. (1989). Position effect variegation in Drosophila: towards a genetics of chromatin assembly. Bioessays, 11(1), 14-17.
Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. (1989). Molecular cloning: A laboratory manual. 2nd ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Selvaraj N, Kasthurirengan S, Vasudevan A, Manickavasagam M, Choi CW and Ganapathi A. (2010). Evaluation of green fluorescent protein as a reporter gene and phosphinothricin as the selective agent for achieving a higher recovery of transformants in cucumber （Cucumis sativus L. cv. Poinsett76） via Agrobacterium tumefaciens. In Vitro Cellular & Developmental Biology—Plant 46, 329–337.
Szwacka M, Malgorzata, Kielkiewicz (2007). Attractiveness of transgenic cucumber plants containing a gene encoding sweet-tasting protein to consumers and pests. Journal of Biotechnology 131(2), s37.
Vasudevan A, Selvaraj N, Ganapathi A. (2007). Agrobacterium-mediated Genetic Transformation in cucumber （Cucumis sativus L.）. American Journal of Biotechnology and Biochemistry 3(1), 24-32.

[1]	李彬琪, 闫佳慧, 李豪, 辛伟, 田云鹤, 杨贞标, 唐文鑫. 黄瓜卷须缠绕过程中小G蛋白活性变化[J]. 植物学报, 2022, 57(3): 299-307.
[2]	李三和, 刘凯, 闸雯俊, 徐华山, 李培德, 周雷, 游艾青. 转BPH9和Bar基因抗褐飞虱耐除草剂水稻‘H23’对非靶标生物的影响[J]. 生物多样性, 2021, 29(4): 488-494.
[3]	刘丽燕, 冯锦霞, 刘文鑫, 万贤崇. 干旱胁迫对转PtPIP2;8基因84K杨苗木光合、生长和根系结构的影响[J]. 植物生态学报, 2020, 44(6): 677-686.
[4]	赖先军,张义正,古英洪,颜朗. 转昆虫抗冻蛋白基因增强甘薯抗冻能力[J]. 植物学报, 2020, 55(1): 9-20.
[5]	杨云卉, 白可喻, Devra Jarvis, 龙春林. 西双版纳黄瓜农家品种及其传统知识[J]. 生物多样性, 2019, 27(7): 743-748.
[6]	马燕婕, 何浩鹏, 沈文静, 刘标, 薛堃. 转基因玉米对田间节肢动物群落多样性的影响[J]. 生物多样性, 2019, 27(4): 419-432.
[7]	郭佳,李衍素,贺超兴,闫妍,于贤昌. 南瓜高效再生体系的建立[J]. 植物学报, 2019, 54(4): 539-546.
[8]	刘华, 常晓蕾, 蒋玮, 白蓝, 郑曙峰, 王金斌, 王维, 潘爱虎, 王荣谈, 唐雪明. 华东三省转Bt基因棉花种植对边际水体中Cry1Ab/c蛋白残留的影响[J]. 生物多样性, 2016, 24(12): 1373-1380.
[9]	邓磊, 杜敏敏, 李传友. 中国科学家在番茄与黄瓜的驯化及品质形成的分子机理研究中取得突破性进展[J]. 植物学报, 2015, 50(3): 275-278.
[10]	陈世璇, 张振南, 王波, 朱燕, 龚月桦, 孙冬梅, 邓馨. 复苏植物旋蒴苣苔J结构域蛋白编码基因BhDNAJC2的克隆、表达与功能[J]. 植物学报, 2015, 50(2): 180-190.
[11]	储成才. 转基因生物技术育种: 机遇还是挑战？[J]. 植物学报, 2013, 48(1): 10-22.
[12]	杨维才. 植物转基因技术——回顾与前瞻[J]. 植物学报, 2013, 48(1): 6-9.
[13]	巴超杰, 薛静, 陈绪清, 杨凤萍, 张立全, 李向龙, 张晓东. 利用花青素可视化跟踪表达系统快速筛选表达Cry1Ab/c基因的转基因玉米[J]. 植物学报, 2013, 48(1): 59-64.
[14]	闫兴富, 周立彪, 张靠稳, 周云锋. 不同密度下辽东栎幼苗子叶丢失及其对幼苗存活和生长的影响[J]. 植物生态学报, 2012, 36(8): 831-840.
[15]	崔贵梅, 孙毅, 郝曜山, 杜建中, 王亦学. 玉米花粉体外萌发方法改进及其对花粉介导转基因的作用[J]. 植物学报, 2012, 47(2): 155-161.

RNAi载体导入黄瓜的遗传转化体系

Transformation of RNAi Vector in Cucumber (Cucumis sativus) In Vitro by Agrobacterium tumefaciens-mediated Transfection

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