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茶树茎段不定芽高效发生体系的建立

任露露, 张有泽, 黄克林, 宛晓春, 张照亮, 朱木兰, 韦朝领

植物学报 2023, 58 (2): 308-315. DOI: 10.11983/CBB22184

摘要（587）

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茶树(Camellia sinensis)是重要的经济作物, 杂合度高且变异度大, 其高效离体再生体系鲜见报道。以舒茶早茎段为起始外植体, 进行不定芽高效发生影响因子研究。结果表明, MS+2 mg∙L^-1 6-BA为定芽诱导的最适配方, 定芽诱导率为84.44%, 吸收底盘膨大率为80%, 利于后续不定芽诱导; MS+2 mg∙L^-1 6-BA+0.2 mg∙L^-1 NAA+0.1 mg∙L^-1 KT+1 mg∙L^-1脯氨酸为不定芽增殖诱导的适宜配方, 不定芽诱导率为88.89%, 平均芽数为7.8。不定根诱导的适宜配方为1/2MS+3 mg∙L^-1 IBA, 生根率为85.56%。采用RAPD和ISSR技术对再生植株进行分子检测, 在连续2代离体再生植株中未发现明显变异。

Primer	Nucleotide sequence (5°-3°)	Number of amplification band	Size range of band (bp)
UBC824	TCTCTCTCTCTCTCTCG	4	500-2000
UBC835	CTCTCTCTCTCTCTCTYC	6	300-1500
UBC840	GAGAGAGAGAGAGAGAYT	2	500-1500
UBC844	CTCTCTCTCTCTCTCTRC	5	500-1500
UBC853	TCTCTCTCTCTCTCTCRT	5	600-1500
UBC854	TCTCTCTCTCTCTCTCRG	6	500-2000
UBC856	ACACACACACACACACYA	5	500-1500
UBC859	TGTGTGTGTGTGTGTGRC	4	500-3000
UBC873	GACAGACAGACAGACA	5	750-3000
UBC880	GGAGAGGAGAGGAGA	6	500-2000
Total		48

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表7 简单重复序列区间(ISSR)引物及其扩增谱

正文中引用本图/表的段落

选取健壮的伸长芽苗转接到含1-4 mg?L-1 IBA的MS和1/2MS培养基中进行不定根诱导。结果表明, 第7天开始茎基部略微膨大, 15天根原基启动, 20天不定根形成。6周后, 1/2MS培养基中的不定根诱导率普遍高于MS培养基。因此, 1/2MS培养基有利于芽苗的不定根诱导。不同浓度IBA均能诱导产生不定根, 随着IBA浓度的升高, 芽苗的生根率呈先上升后下降趋势, 当IBA浓度为3 mg?L-1时, 芽苗的生根率最高, 为85.56%, 诱导出的不定根较为粗壮, 侧根较多, 植株生长健壮(图1E)。因此, 茶树不定根诱导的适宜配方为1/2MS+3 mg?L-1 IBA (表5)。

与自然环境相比, 体外培养更易引起遗传变异。因此, 在确认繁殖成功之前, 有必要对再生植株的遗传稳定性进行分析。本研究中, 我们选用RAPD和ISSR分子标记, 共扩增出161条带, 平均每个引物6.4条带(表6, 表7)。15个RAPD引物共扩增出113条清晰的条带, 长度在250-5 000 bp之间。单个RAPD引物扩增的条带数介于4-12条之间。引物S132的RAPD扩增模式如图2A所示, 引物S133的RAPD扩增模式如图2B所示。10个ISSR引物共扩增出48条清晰的条带, 长度在300-3 000 bp之间。单个ISSR引物扩增的条带数为2-6条。引物UBC854的ISSR扩增模式如图3A所示, 引物UBC880的ISSR扩增模式如图3B所示。

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