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植物小RNA荧光原位杂交实验方法
植物学报
2021, 56 (3):
330-338.
DOI: 10.11983/CBB21057
小RNA是对植物生长发育十分重要的一类小分子核苷酸, 在多种生命过程以及胁迫响应中发挥重要调控作用。对小RNA的定位研究有助于揭示它们的功能, 而小RNA荧光原位杂交(sRNA-FISH)是一种通过荧光检测技术对生物体内小 RNA进行定性或半定量分析的技术, 目前该技术已经在动物体内被广泛应用, 而在植物体内的应用还比较少。该文详细介绍了基于超高分辨率显微镜的sRNA-FISH的具体操作流程以及注意事项, 该技术可用于探究植物组织内小RNA的表达与定位。  View image in article
图1
小RNA荧光原位杂交实验流程图
(A) 探针设计; (B) 石蜡切片; (C) 探针杂交; (D) 一抗孵育; (E) 二抗孵育; (F) 光谱拆分以及激光共聚焦显微成像
正文中引用本图/表的段落
主要实验步骤包括: 根据小RNA序列设计与合成LNA探针并进行DIG标记; 植物材料的固定、包埋和切片; 探针杂交; 一抗孵育和洗脱; 二抗孵育和洗脱; 光谱拆分和激光共聚焦显微成像(图1)。
本文的其它图/表
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