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植物小RNA荧光原位杂交实验方法
植物学报
2021, 56 (3):
330-338.
DOI: 10.11983/CBB21057
小RNA是对植物生长发育十分重要的一类小分子核苷酸, 在多种生命过程以及胁迫响应中发挥重要调控作用。对小RNA的定位研究有助于揭示它们的功能, 而小RNA荧光原位杂交(sRNA-FISH)是一种通过荧光检测技术对生物体内小 RNA进行定性或半定量分析的技术, 目前该技术已经在动物体内被广泛应用, 而在植物体内的应用还比较少。该文详细介绍了基于超高分辨率显微镜的sRNA-FISH的具体操作流程以及注意事项, 该技术可用于探究植物组织内小RNA的表达与定位。  View image in article
图2
小RNA FISH效果示例
(A) miR165/166反义寡核苷酸探针; (B) 阴性对照: miR165/ 166顺义寡核苷酸探针。Bars=50 μm
正文中引用本图/表的段落
(32) 利用超高分辨率激光共聚焦显微镜获得带有荧光标记的纯二抗的光谱, 作为对照用于后期样品的光谱线性拆分。建议使用2种浓度作为对照, 对于较高浓度的对照, 将1 μL二抗与1滴封固剂混合; 对于较低浓度的阳性对照, 首先使用1×洗涤缓冲液以1:1 000的比例稀释二抗, 然后与1滴封固剂混合。如果小RNA信号较弱, 建议使用较低浓度的二抗作为对照。成像结果可参考图2。
本文的其它图/表
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