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粉美人萱草的快繁技术和大田种植

吕秀立, 于泽群, 陈香波, 傅仁杰, 缪珊珊, 杜安

植物学报 2022, 57 (3): 350-357. DOI: 10.11983/CBB21182

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以粉美人萱草(Hemerocallis fulva cv. ‘Fenmeiren’)的花茎为外植体进行离体培养, 该研究成功建立了粉美人萱草组培快繁技术。结果表明, 6月获得的外植体用浓度为15% (v/v)的次氯酸钠溶液消毒8分钟, 外植体存活率达95%; 最佳增殖培养基为MS+1.0 mg·L^-1 6-BA+0.004 mg·L^-1TDZ+0.1 mg·L^-1 NAA, 培养30天后, 月增殖系数达2.9; 壮苗培养基为MS+0.1 mg·L^-16-BA+0.1 mg·L^-1 IBA, 在该培养基中, 组培苗不再分化, 长势健壮; 最佳生根培养基为1/2MS+0.4 mg·L^-1 IBA+20 g·L^-1蔗糖, 生根率达95%; 移栽基质采用珍珠岩:草炭=1:2 (v/v), 通过精细化管理, 成活率可达85%, 出圃合格率为75%。目前已实现规模化繁殖, 并生产组培苗2.0×10⁵株, 大田种植表现良好。

Medium	IBA (mg·L^-1)	Sucrose (g·L^-1)	Plant- let No.	No. of roo- ting buds	Rooting rate (%)
MS	0.2	30	20	7±1 e	35±0.05 e
MS	0.4	30	20	11±1 c	55±0.05 c
MS	0.8	30	20	14±1 b	70±0.05 b
MS	0.4	10	20	7±1 e	35±0.05 e
MS	0.4	20	20	15±1 b	75±0.05 b
MS	0.4	40	20	9±1 d	45±0.05 d
1/2MS	0.4	20	20	19±1 a	95±0.05 a

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表6 不同培养基对生根的影响

正文中引用本图/表的段落

摘要：以粉美人萱草(Hemerocallis fulva cv. ‘Fenmeiren’)的花茎为外植体进行离体培养, 该研究成功建立了粉美人萱草组培快繁技术。结果表明, 6月获得的外植体用浓度为15% (v/v)的次氯酸钠溶液消毒8分钟, 外植体存活率达95%; 最佳增殖培养基为MS+1.0 mg·L-1 6-BA+0.004 mg·L-1 TDZ+0.1 mg·L-1 NAA, 培养30天后, 月增殖系数达2.9; 壮苗培养基为MS+0.1 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 IBA, 在该培养基中, 组培苗不再分化, 长势健壮; 最佳生根培养基为1/2MS+0.4 mg·L-1 IBA+20 g·L-1蔗糖, 生根率达95%; 移栽基质采用珍珠岩:草炭=1:2 (v/v), 通过精细化管理, 成活率可达85%, 出圃合格率为75%。目前已实现规模化繁殖, 并生产组培苗2.0×105株, 大田种植表现良好。

生根培养基以1/2MS和MS为基础培养基, 添加不同浓度的IBA和蔗糖。本实验共设置7种组合配方(表6), 筛选最优生根培养基。生根苗在温室内过渡移栽。

外植体在初代培养基上生长10天, 潜伏芽部位逐渐膨大, 出现绿色芽点; 30天时, 发育成形态完整的无菌幼苗, 2枚叶片对生, 每个外植体经初代培养可诱导出1-2个无菌芽(图1C)。切下无菌苗转移至新鲜培养基, 积累到一定数量, 挑选健壮一致的无菌苗转入设计的增殖培养基, 筛选最佳增殖培养基。本研究中的增殖培养基是在MS+0.1 mg·L-1 NAA的基础上添加不同浓度的6-BA和TDZ, 培养1个月后统计种苗数量。结果表明, 6-BA浓度过高或过低, 增殖率均会降低, 当6-BA浓度为1.0 mg·L-1时, 粉美人萱草的增殖率最高, 为0.9 (表4); 当培养基中添加TDZ时, 增殖率明显升高, 当TDZ浓度为0.004 mg·L-1时, 增殖率达到2.9, 组培苗发育正常, 叶色浓绿, 长势旺盛(图1D); 继续提高TDZ浓度, 增殖率提高明显, 但分化出的芽较小, 基部容易形成愈伤组织, 并在愈伤组织上继续分化出丛生芽, 不利于后续分切操作(图1E)。根据种苗长势以及分化情况, 选择MS+1.0 mg·L-1 6-BA+ 0.004 mg·L-1 TDZ+0.1 mg·L-1 NAA为粉美人萱草的最佳增殖培养基, 与其它处理相比, 差异显著(P<0.05)。

组培苗在壮苗培养基上长至4 cm高时, 可切成单芽, 用于诱导生根。我们发现, 随着IBA浓度的升高, 生根率明显提高, 当IBA浓度为0.8 mg·L-1时, 组培苗基部开始出现愈伤组织, 不利于生根及后期移栽, 因此确定诱导生根的适宜IBA浓度为0.4 mg·L-1, 生根率达55% (表6)。降低蔗糖浓度, 生根率反而提高, 当添加蔗糖浓度为20 g·L-1时, 生根率提高至75%; 继续降低蔗糖浓度至10 g·L-1或提高至40 g·L-1, 生根率均会降低(表6)。此外, 大量元素减半的1/2MS比MS更利于生根, 生根率可达95%, 根系粗短, 呈鲜活的白色, 色泽莹润, 无愈伤组织出现, 每株可产生6-8条根(表6; 图1G)。因此, 我们确定最适生根培养基为1/2MS+0.4 mg·L-1 IBA+20 g·L-1蔗糖。

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