植物学报 ›› 2017, Vol. 52 ›› Issue (6): 783-787.doi: 10.11983/CBB16246

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北玄参毛状根诱导及其植株再生

任如意*(), 薛巨坤, 国会艳, 魏继承   

  1. 牡丹江师范学院生命科学与技术学院, 牡丹江 157011
  • 收稿日期:2016-12-13 接受日期:2017-07-04 出版日期:2017-11-01 发布日期:2018-02-22
  • 通讯作者: 任如意 E-mail:swxrry@126.com
  • 基金资助:
    牡丹江师范学院省级重点创新预研项目(No.SY201318)

Induction of Hairy Roots of Scrophularia buergeriana and Its Plant Regeneration

Ren Ruyi*(), Xue Jukun, Guo Huiyan, Wei Jicheng   

  1. College of Life Sciences and Technology, Mudanjiang Normal University, Mudanjiang 157011, China
  • Received:2016-12-13 Accepted:2017-07-04 Online:2017-11-01 Published:2018-02-22
  • Contact: Ren Ruyi E-mail:swxrry@126.com

摘要:

利用发根农杆菌A4和R1601感染北玄参(Scrophularia buergeriana)叶片外植体, 诱导产生毛状根, 产生的毛状根可在无激素的液体和固体MS培养基上快速生长。rolB基因的PCR检测表明, Ri质粒中的T-DNA片段整合到了北玄参毛状根的基因组中。毛状根在附加0.5 mg·L-1 6-BA及0.1 mg·L-1 NAA的MS固体培养基上形成绿色愈伤组织, 之后形成不定芽, 并获得再生植株; 毛状根在附加0.5 mg·L-1 6-BA及0.02 mg·L-1 NAA的MS固体培养基上培养约15-20天可直接形成不定芽, 且不定芽的诱导率达85%。

关键词: 北玄参, 发根农杆菌, 毛状根, 植株再生

Abstract:

Hairy roots were induced by infecting leaf explants of Scrophularia buergeriana with Agrobacterium rhizo- genes strains A4 and R1601. Hairy roots could grow rapidly and autonomously in liquid or solid plant-growth regulator-free MS medium. The transformation was confirmed by PCR amplification of the rolB gene of the Ri plasmid from S. buergeriana hairy roots. Hairy roots could form green callus in MS medium with 0.5 mg·L-1 6-BA and 0.1 mg·L-1 NAA, then regenerated plantlets were induced from the callus. A whole transgenic plantlet was obtained. Adventitious buds could be directly induced from hairy roots in MS medium with 0.5 mg·L-1 6-BA and 0.02 mg·L-1 NAA after about 15-20 d, with the induction rate of buds up to 85%.

Key words: Scrophularia buergeriana, Agrobacterium rhizogenes, hairy root, plant regeneration

图1

北玄参毛状根的诱导、离体培养与植株再生(A) 发根农杆菌A4侵染16天后叶片外植体产生的毛状根; (B) MS+0.2 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 NAA培养基上毛状根形成的绿色愈伤组织; (C) MS+0.5 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 NAA培养基上毛状根形成的绿色愈伤组织并有不定芽生成; (D) MS+0.5 mg·L-1 6-BA+ 0.02 mg·L-1 NAA培养基上毛状根直接长出不定芽; (E) 不定芽形成的芽丛; (F) 再生植株"

图2

北玄参毛状根(A4) rolB基因PCR扩增产物的凝胶电泳1-4: 毛状根DNA扩增片段; 5, 6: 非转化根DNA扩增结果; 7: 发根农杆菌菌落扩增的片段; M: DL2000 marker"

表1

6-BA和NAA组合对北玄参毛状根愈伤组织诱导及植株再生的影响"

Med- ium 6-BA
(mg·L-1)
NAA
(mg·L-1)
Change of hairy roots
1 0.1 0.02 Few adventitious buds induced
2 0.1 0.1 Formation of light yellow callus
3 0.2 0.02 Few adventitious buds induced
4 0.2 0.1 Formation of green callus
5 0.5 0.02 More adventitious buds developed
6 0.5 0.1 Firstly formed green callus, then
developed more adventitious buds
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